翻译：陶庆春 周珍

单位：北京中医药大学第三附属医院

一、前言

本文件的目的是提供实验室生物安全的临时指南，该指南与符合中国武汉确定的新型病原体(即2019新型冠状病毒(2019-nCoV)，即命名为COVID-19的疾病)病例定义的患者临床标本的检测相关。

由于我们对2019-nCoV造成的疾病的了解有限，但增长迅速，世界卫生组织将继续监测事态发展并将在必要时修订这些建议。

2019-nCoV实验室生物安全的要点

所有程序都必须在风险评估的基础上，并且只能由证明有能力的人员在任何时候严格遵守任何相关协议下执行。

所有标本的初始处理(灭活前)应在经过验证的生物安全柜或密闭装置中进行。

非增殖性诊断实验室工作(如测序、NAAT)应在相当于BSL-2，增殖性诊断实验室工作(如病毒培养、分离或中和分析)有空气单向流动密封BSL-3中进行。

应使用经证实具有抗包膜病毒活性的适当消毒剂(如次氯酸盐(漂白剂)、酒精、过氧化氢、季铵化合物和酚类化合物)。

疑似或确诊病例的患者标本应以UN3373“生物物质，B类”运输。病毒培养物或分离物应作为A类UN2814“感染人类的传染性物质”运输。

二、实验室安全

核心要求：

第四版WHO生物安全手册定义的最低要求，是一套实验室安全的基本的和必须的风险控制措施.，这些措施反应了国际标准和最好的生物安全措施，是生物实验室生物安全必须的，也是生物安全风险最小的。

确保健康实验室遵守适当的生物安全措施。应由受过相关技术和安全程序培训的工作人员在装备适当的实验室中对符合疑似病例定义的患者进行2019-nCoV或临床标本的检测。在任何情况下都应遵守国家实验室生物安全指南。关于实验室生物安全指南的一般信息，请参阅WHO实验室生物安全手册，第三版，在第四版发布前的过渡阶段。

http：//www.who.int/csr/resources/publications/biosafety/WHO_CDS_CSR_LYO_2004_11/en/

要点：

每个实验室应进行本地(即机构)风险评估，以确保其有能力在适当的风险控制措施下安全地进行预期的测试。

在接收和处理标本(包括用于血清学检测的血液)时，应遵循良好的微生物操作流程和程序(GMPP)是基本实验室流程和程序。

处理和处理疑似或确诊为2019-nCoV病毒感染病例的标本，用于额外的实验室检测，如血液学或血气分析，应遵循当地处理潜在传染性物质的指南。

应采用下文附件1中详述的“核心要求”的流程和程序，并根据当地风险评估的信息选择适当的“强化控制措施”，开展非增殖诊断实验室工作，包括对疑似或确诊感染2019-nCoV病毒的患者的临床标本进行测序、核酸扩增试验(NAAT)。在此期间，WHO实验室生物安全手册第三版中的生物安全等级2(BSL2)仍然适用，直到第四版取而代之。

处理高浓度活病毒材料(如进行病毒繁殖、病毒分离或中和试验时)或大量传染性材料时，应仅由实验室中经过适当培训且有能力满足基本要求和实践的人员进行，例如BSL-3。

控制措施要点：

一系列实验室风险控制措施可能需要提供适当的实验室设备，因为风险评估显示，实验室操作或活动与相关风险，不能接受核心要求以下的条件。

包括测序和NAAT在内的所有样本的初始处理(灭活前)应在经过适当维护和验证的生物安全柜(BSC)或基本密封的措施装置中进行。

在推荐的接触时间、稀释度和制备后的工作溶液在有效期内，使用适当的消毒剂，并证明其具有抗包膜病毒的活性。

所有技术程序的执行应尽量减少气溶胶和液滴的产生。

处理这些样本的所有实验室人员都应穿戴由详细风险评估确定的适当的个人防护设备。

疑似或确诊病例的患者标本应以UN3373运输“生物物质，B类”。病毒培养物或分离物应作为A类，UN2814运输，“影响人类的传染性物质”。

三、推荐实验室特定操作相关的最低/基本工作条件的建议

以下的附加建议提供了与实验室特定操作相关的最低/基本工作条件：

1、风险评估

风险评估是一个系统化的过程，它收集信息，评估暴露或释放工作场所危险的可能性和后果，并确定适当的风险控制措施，以将风险降低到可接受的水平。重要的是要注意，单独的风险也不能暴露，以免对人类或动物构成危险。因此，还必须考虑所用设备的类型以及将使用的实验室执行的程序。

强烈建议从每个流程步骤开始执行当地的风险评估，即从样本收集、样本接收、临床测试、聚合酶链反应和病毒分离开始(仅在适用的情况下)。然后，在每个过程步骤中将考虑特定的危险，例如样品处理过程中的气溶胶暴露、样品处理过程中的眼睛飞溅；感染性培养物溢出；和样本泄漏(在样本接收的情况下)，具有评估的风险等级。对于每个已识别的风险，应选择并实施适当的风险控制措施，包括但不限于以下建议，以便将剩余风险降低到可接受的水平。

风险评估模板作为附件2附后，旨在作为一个例子并促进该程序的实施。

2、常规实验室程序，包括非增殖诊断工作和PCR(聚合酶链反应)分析

对疑似或确诊感染新型冠状病毒患者的临床标本进行的，基于非培养的诊断实验室工作和PCR分析，应采用常规临床和微生物实验室所选择适当的实施操作程序进行，如下所述为“核心要求”。

然而，对所有潜在传染性物质的所有操作，包括那些可能导致传染性物质飞溅、液滴或气溶胶的操作(例如，装载和卸载密封的离心杯、研磨、混合、剧烈摇动或混合、声波破坏、打开内部压力可能不同于环境压力的，含有传染性物质的容器)，应由具有能力证明的人员，在经过适当维护和验证的生物安全柜（BSCs）或主要密封装置中进行。

常规实验室实施程序的例子包括：

血清、血液(包括血液学和临床化学)、呼吸样本(如鼻咽和口咽拭子)、痰和/或气管内吸出物或支气管肺泡灌洗物、粪便或其他样本的诊断测试；

对呼吸道样本中的霉菌和细菌培养物进行的常规检查。处理和处理标本时，应始终遵循“核心要求”(CR)，包括良好的微生物操作和程序(GMPP)，包括但不限于以下内容。更多细节将在世界卫生组织生物安全视频系列中进行解释和演示，可从以下链接获得：

https：//www.who.int/ihr/publications/biosafety-video-series/en/

3、合适的消毒剂

尽管对这种新型病毒知之甚少，但根据与非典病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)相似的遗传特征，表明2019-nCoV可能对证实具有抗包膜病毒活性的消毒剂的敏感。如果按照制造商的使用建议，包括次氯酸钠(漂白剂)(例如，一般表面消毒为1，000ppm(0.1%)，血液溢出消毒为10，000ppm(1%)，62-71%乙醇，0.5%过氧化氢，季铵化合物和酚类化合物。其他杀生物剂，如0.05-0.2%杀藻胺或0.02%二氯己定可能效果较差。

不仅要特别注意消毒剂的选择，还要注意配制后的，消毒剂的接触时间(如10分钟)、稀释度(即活性成分的浓度)和有效期。

众所周知，人类冠状病毒一般会在金属、玻璃或塑料等无生命物质表面上，存活长达9天。

4、病毒分离

除非一个国家另有决定，考虑到上述新获得的知识和有效的预防措施，对疑似或确诊感染新型冠状病毒的患者的临床标本进行病毒分离，应仅在能够满足以下额外遏制要求的实验室进行：

受控通风系统维持实验室室内向内的气流方向。

实验室的废气不会再循环到建筑内的其他区域。如果在实验室内进行恢复和再循环，空气必须经过HEPA过滤。当实验室的空气被排放到室外时，必须远离已使用的建筑物和进气口。这些空气应该通过HEPA过滤器排出。

对传染性或潜在传染性物质的所有操作必须在适当维护和验证的有效的BSCs中进行。

实验室工作人员应穿戴防护设备，包括一次性手套、正面或包裹式长袍、工作服或袖子完全覆盖前臂的工作服、头罩、鞋套或专用鞋、眼睛保护装置(护目镜或面罩)。

风险评估应告知呼吸防护器材的使用(经适配的微粒呼吸器，例如欧盟FFP2、美国6NIOSHcertifiedN95或同等产品，或更高防护)。

实验室应配备专用洗手池。

应使用密封的离心机转子或样品杯进行样品离心。这些转子或杯状物应在BSC器中装载和卸载。

5、与病毒分离研究相关的额外风险

某些实验程序可能会带来额外的病毒突变风险，可能会增加致病性和/或传播性，或者病毒的抗原性或药物敏感性发生改变。在执行以下任何程序之前，应进行特定的风险评估，并采取特定的风险降低措施：

JournalofHospitalInfection

https：//doi.org/10.1016/j.jhin.2020.01.022

细胞培养物与不同冠状病毒的混合感染，或任何可能导致混合感染的程序；

抗病毒药物存在下的病毒培养；

故意对病毒进行基因改造。

6、与感染新型冠状病毒的动物一起工作

下列活动需要动物设施——生物安全3级设施和工作程序，详见WHO实验室生物安全手册第3版。

从新的冠状病毒样本中给动物接种疫苗，以便得到新的发现。

任何涉及动物接种以确认和/或表征推定的新型冠状病毒制剂的方案

7、将标本转移至具有以下特征的实验室应有适当的防护措施到位

不能满足上述生物安全建议的实验室应考虑将标本转移到国家、区域或国际转诊实验室，这些实验室的2019-nCoV检测能力能够满足生物安全要求。

四、包装和运输

实验室内和实验室间运输的所有材料应放在二级容器中，以******限度地降低破损或溢出的可能性。一个例子包括将材料从生物安全柜转移到保育箱，反之亦然。离开BSC的样品应进行表面净化。WHOT生物安全视频系列提供了详细指导，特别是“良好微生物做法和程序(GMPP)7：运输”：

https：//www.who.int/ihr/publications/biosafety-video-series/en/

在国家边界内运输标本应符合适用的国家法规。对于新型冠状病毒标本的跨境运输，应遵循联合国规则，《航空运输危险货物安全技术指南》(Doc9284)和任何其他适用法规，具体取决于所使用的运输方式。更多信息可参见WHO《2019-2020年感染性物质运输法规指南》(自2019年1月1日起适用)。

对以上的概述4

https：//www.who.int/ihr/publications/WHO-WHE-CPI-2019.20/en/

传染性物质的运输也可以在《流行病管理手册》

https：//apps.who.int/iris/handle/10665/272442.的工具箱4中找到.

当出于诊断或研究目的运输疑似或确诊病例的患者标本时，应作为UN3373“生物物质，B类”运输。病毒培养物或分离物应作为A类UN2814“影响人类的传染性物质”运输。所有被运输的样本(无论是UN3373还是UN2814)都应该有适当的包装、标签和文件，如上述文件所述。

附件1、核心要求

1、良好的微生物操作程序(GMPP)是******的实践：

切勿在实验室储存食物或饮料，或个人物品，如外套和袋子。饮食、吸烟和/或涂抹化妆品等活动只能在实验室外进行。

无论是否戴手套，都不要在实验室内将笔、铅笔或口香糖等材料放入口腔。在处理完任何生物材料(包括动物)后，在离开实验室之前，以及已知或怀疑手上有污染的任何时候，最好用温水和肥皂彻底洗手。

确保明火或热源从不靠近易燃物品，也从不无人看管。

进入实验室前，确保覆盖物覆盖在任何伤口或破损的皮肤上。

确保在进入实验室之前，实验室设备和消耗品的供应，包括试剂、个人防护设备和消毒剂，对于正在进行的活动来说是足够和适当的。

确保供应品储存适当(即根据储存说明)且安全，以降低实验室人员发生意外和事故(如溢出、绊倒或跌倒)的几率。

确保所有生物制剂、化学和放射性材料的适当标签。

使用屏障(如塑料覆盖物)保护书面文件免受污染，尤其是那些可能需要从实验室移出的文件。

确保小心、及时、不匆忙地执行工作。应避免疲劳时工作。

保持工作区域整洁、干净，安静。没有工作不需要的杂物和材料。

禁止使用耳机，耳机会分散人员的注意力，并防碍听到设备或设施的警报。

适当遮盖或移除任何可能撕裂手套材料、容易被污染或成为感染媒介的珠宝。如果定期佩戴，应考虑对珠宝或眼镜进行清洁和去污。

避免使用移动电子设备(例如，移动电话、平板电脑、笔记本电脑、闪存驱动器、记忆棒、照相机和/或其他便携式设备，包括用于DNA/RNA测序的设备)进行的实验室程序没有特别要求时。

将移动电子设备存放在不易被污染或感染的地方。如果此类装置不可避免地与生物制剂非常接近，请确保在离开实验室之前，它们受到物理屏障的保护或已被净化。

技术程序：

避免吸入生物制剂。操作样品时，使用好的技术来******限度地减少气溶胶和液滴的形成。避免摄入生物制剂和接触皮肤和眼睛。

处理标本时，请始终佩戴一次性手套。

避免戴手套的手接触面部。

在可能发生飞溅的操作过程中，保护或以其他方式保护嘴、眼睛和面部。

如有操作必要，要小心处理所有尖锐物和针头，以防止生制剂的伤害和注射。尽可能用塑料制品替换任何玻璃器皿。

对于需要剪刀的工作，最好使用钝头或圆头的剪刀，而不是尖头的剪刀。

使用安瓿开启器来安全处理安瓿。将使用注射器或针头的风险降至最低。切勿复帽、夹住或取出一次性注射器中的针头。

将任何尖锐物品(例如针头、与注射器结合的针头、刀片、碎玻璃)放入装有密封盖的穿刺或抗穿刺容器中。

防止生物制剂的扩散，将标本和培养物丢弃在防漏容器中，容器顶部应适当固定，然后再放入专用废物容器中。考虑用浸有消毒剂的垫子/纱布打开管子。在工作程序结束时，如果有任何材料溢出或明显被污染，用合适的消毒剂对工作表面进行消毒。确保消毒剂对被处理的病原体有效，并与传染性废物接触足够长的时间，以实现完全灭活。

https：//www.who.int/gpsc/tools/GPSC-HandRub-Wash.pdf

2、人员能力和培训

一般熟悉和意识培训：

介绍实验室布局、操作准则、当地指南、安全手册、风险评估、立法要求和应急程序。

特定工作培训：

培训要求可能因工作职能而异。然而，一般来说，所有参与处理生物制剂的人员都必须接受GMPP方面的培训。在独立工作之前，必须对使用能力和熟练程度验证评估，随后进行定期审查和复习培训。更新新程序等相关信息必须传达给相关人员。

安全和安保培训：

所有人员必须意识到实验室中存在的危险及其相关风险；安全工作程序；安全措施；以及应急准备和反应。

3、环境设施

必须提供足够的空间和指定的洗手盆，适当限制人员的进入。

实验室的门必须贴有适当的标签，实验室的墙壁、地板和家具必须光滑、易于清洁、不渗透液体、耐实验室通常使用的化学品和消毒剂。

实验室通风(包括加热/冷却系统，尤其是风扇/局部冷却分流系统空调装置，特别是在改装时)应确保气流不会危及安全工作。必须考虑合成气流的速度和方向，应避免紊流；这也适用于自然通风。

实验室空间和设施必须足够且适合安全处理和储存传染性和其他危险材料，如化学品和溶剂。

必须在实验室外提供饮食设施，并且可以使用临近的急救设施。

实验室附近必须有适当的废物净化方法，例如消毒剂和高压灭菌器。

设计中必须考虑废物管理。安全系统必须涵盖基于风险评估的火灾、电气紧急情况和紧急/事故响应设施。

必须有可靠和充足的电力供应和照明，以保证安全出口。

在设计中必须考虑当地风险评估中指出的紧急情况，并应包括地理/气象背景。

4、样本接收和存储

实验室收到的样本必须附有足够的信息，以确定它是什么，何时何地采集或制备的，以及要进行哪些测试和/或程序(如果有)。

考虑在BSC中打开包装，打开包装和接收标本的人员必须经过充分的培训，了解引起相关的危险；根据上述GMPP，如何采取必要的预防措施；如何处理破损或泄漏的容器；以及如何处理溢出物和使用消毒剂来控制任何污染。

样本必须储存在具有足够强度、完整性和容量的容器中，以容纳样本；正确使用盖子或塞子时防漏；尽可能用塑料制成；包装外部没有任何生物材料；正确标记、标记和记录以方便识别；并且由适合所需存储类型的材料制成。

在将标本转移到其他区域进行进一步操作(如PCR分析)之前，无论何时使用灭活步骤，都必须对灭活方法进行适当验证。

5、净化和废物管理

在实验室操作过程中，任何已知或可能被生物制剂污染的表面或材料必须正确消毒，以控制感染风险。

在净化和/或处置之前，必须采用识别和分离受污染材料的适当程序。

当无法在实验室区域或现场进行净化时，受污染的废物必须以批准的(防漏的)方式包装，以便转移到另一个具有净化能力的设施。

6、个人防护设备

实验室必须使用实验室外套，以防止个人衣物被生物制剂溅到或污染。实验室外套必须有长袖，最好有弹性或合身的袖口，并且必须封闭穿着，袖子永远不应该卷起。外套必须足够长以覆盖膝盖，但不能拖在地板上。在实验室穿戴时应该系好。在可能的情况下，实验室涂层的织物应该是防溅的和重叠的，以提供坚实的正面。实验室外套只能在指定区域穿着。不使用时，应妥善存放；它们不应该挂在其他实验服的上面，或者挂在储物柜或挂个人物品的挂钩上。

所有可能涉及有意或无意接触血液、体液和其他潜在物质的程序都必须佩戴合适的一次性手套.传染性物质，它们不得消毒或重复使用，因为暴露在消毒剂中，长时间佩戴会降低手套的完整性，降低对使用者的保护。手套在使用前应经常检查。

每当有必要保护眼睛和面部免受飞溅、撞击物体和人工紫外线辐射时，必须佩戴安全眼镜、护目镜、面罩或其他保护装置。可以使用眼部保护装置，但每次使用后必须定期清洁。如果溅出，必须用合适的消毒剂消毒。

鞋类必须在实验室穿着，其设计必须能******限度地减少滑倒和绊倒，并能降低物体坠落和接触生物制剂造成伤害的可能性。

呼吸保护通常不是核心要求的一部分。然而，在这种特殊情况下，应进行局部风险评估，以确定是否需要使用呼吸保护，特别是当可能产生气溶胶和液滴的程序将在BSC之外执行时，例如离心、处理泄漏的样品和可能导致喷溅的程序(例如装载和卸载密封的离心杯、研磨、混合、剧烈摇动或混合、声波破坏、打开内部压力可能不同于环境压力的感染性材料容器)。

7、实验室设备

当与GMPP一起有效应用时，实验室设备的安全使用将有助于将处理或操纵生物制剂时将人员暴露的可能性降至最低。

为了有效降低风险，实验室管理层必须确保为设备提供足够的使用空间。必须为设备的运行和维护提供适当的预算，包括纳入设施设计的设备，并应附有概述其安全特性的规范。所有操作或维护设备的人员都必须经过适当的培训，并能够证明其熟练程度。

8、应急/事故响应预案

即使在开展低风险工作和遵循所有生物安全核心要求时，事故仍有可能生。为了减少接触/释放生物制剂的可能性或减少此类事件的后果，必须制定一个应急计划，提供适用于工作和当地环境的可能紧急情况下应遵循的具体标准作业程序。人员必须接受这些程序的培训，并定期接受再培训，以保持应急能力。

急救包，包括医用用品，如瓶装洗眼液和绷带，必须可供人员使用并易于获取。这些必须定期检查，以确保产品在使用日期内并有足够的供应。

所有事件必须及时报告给适当的人员。事故和事件的书面记录必须保持，符合适用的国家法规。必须及时报告和调查发生的任何事故，并用于及时更新实验室程序和访问应急预案。

包括消毒剂在内的防溢洒箱，必须便于人员拿到。根据泄漏的大小、位置、浓度和/或体积，可能需要不同的程序。必须为实验室制定清洁和净化溢出物的书面程序，并由经过适当培训的人员遵循。

9、职业保健

雇用机构必须通过实验室主任负责确保实验室人员的健康，得到充分检查和报告。

可能需要实验室人员的体检或健康状况信息，以确保他们在实验室工作的安全性。

附件2、风险评估模板

虽然这里提供了一种定性方法来联合风险矩阵中的可能性和严重性参数，作为风险评估方法，但重要的是要注意，定量(例如，简单数值的复杂数学模型的评分方案)和混合(半定量)方法也可以用于风险评估。实验室应使用最能满足其独特需求的风险评估/评估方法，同时不排除开发定制评估方法、评分方法和定义参数的可能性。虽然该模板主要是为生物安全风险评估而开发的，但也可用于实验室活动的一般安全风险评估，特别是当生物安全和一般安全风险相互关联时，例如，在适当和适用的情况下，样本收集和运输。

1、收集信息（风险识别）

2、评估风险

3、制定风险控制策略

4、选择并实施风险控制措施

5、

五、致谢

为本指南的当前修订做出了贡献的以下人员：

泰国StuartBlacksell，MahidolOxford热带医学研究所；瑞士伯尔尼大学传染病研究所KathrinSummermatter。

世卫组织卫生应急计划：KazunobuKojima，RicaZinsky，ZsofiaIgloi。

世卫组织参考号：WHO/WPE/GIH/2020.1